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島津制備HPLC 色譜柱的選擇方法
發布時間:2020-01-20   點擊次數:1369次

填料的選擇

在進行制備 HPLC 時,需要選擇純度盡可能高,并可同時得到大量化合物的色譜柱。硅膠基體填充制備 HPLC 色譜柱,廣泛用于合成化學、天然物化學等領域。反相制備 HPLC 色譜柱利用不同化學鍵合相保持峰型,實現高純度精制。特別是 Inertsil 系列制備 HPLC 色譜柱同時具備 HPLC 分析色譜柱的高分離性能和低吸附性。此外,在進行制備 HPLC 時,與樣品負荷量的大小、較短的色譜柱清洗時間、再平衡化時間快速化、溶劑去除的速度等相關的洗脫液的選擇很重要??扇鏉M足上述項目要求的 Inertsil ODS-3 是更適于反相 HPLC 制備的色譜柱。

填料

特性

InertSustain C18

耐久性*,使用強酸強堿樣品及洗脫液時推薦使用。

Inertsil ODS-4

保留能力中等,理論塔板數、分離度適中。

Inertsil ODS-3

保留能力*,可獲得大負荷量的色譜柱,制備的首要之選色譜柱。

除上述之外,也提供其他反相、正相、SEC、手性制備用色譜柱。

 

 

色譜柱內徑和負荷量、流量關系

制備 HPLC 色譜柱的內徑從 6.0mm 到 100mm 不等,可以根據使用目的及使用裝置的設定流量范圍不同進行選擇。填料及色譜柱長度等內徑以外的條件全部相同的話,流量及樣品負荷量根據色譜柱的橫截面積的比例調整后,幾乎可以得到相同的色譜圖。以下是制備 HPLC 常用的制備柱內徑及使用流量的總結,供大家參考。

內徑

負荷量

使用流量標準(mL/min) *1

手性

備注

反相·正相

SEC

HILIC

4.6mm

1

1

0.2~0.3

0.5

1

反相、正相、HILIC、手性的規模放大研究一般使用內徑4.6mm的色譜柱。

7.6-

8.0mm

2.7

2.7

0.5~1.0

1.4

2.7

可以用在普通分析裝置上的半制備 HPLC 色譜柱。用 SEC 的規模放大研究一般使用內徑 7.6 ~ 8.0mm的色譜柱。

10mm

5

5

1.0~1.5

2.4

5

14mm

9

9.2

1.8~2.5

4.6

20mm

19

19

3.8~5.4

9.5

19

制備 HPLC 用色譜柱。由于流量范圍增大,需要使用裝置。而且,內徑 50mm 以上的尺寸,為了使安裝配管時簡單化,大多采用法蘭型式的色譜柱。

30mm

45

45

9.0~14

21

45

50mm

130

130

26~39

60

50

*3

100mm

240

480

 *2

48~72

 *2

120

*2

200

*3

*1:5μm 粒徑柱的情況

*2:10μm 粒徑柱的情況

*3:20μm 粒徑柱的情況

 

色譜柱長度

柱長

特性

50mm 以下

主要作為制備柱的保護柱。

50~100mm

分離沒有障礙的話,可實現短時間制備。

100~250mm

常用的長度。制備HPLC中,推薦使用容易取得高理論塔板數的250mm色譜柱。

250mm 以上

制備液相為了進行高流量分析,使用粒徑大于10μm、壓力低的填料。由于大粒徑填料不易取得高理論塔板數,在制備HPLC中會使用長色譜柱彌補低理論塔板數這一缺陷。而且,尺寸排阻色譜為了達到相同目的,也會使用長柱。

 

制備HPLC 規模放大

使用制備HPLC 色譜柱研究純化條件時,所需樣品量和溶劑量多,造成成本高。所以,一般使用分析色譜柱探討精制條件,然后規模放大到制備色譜柱。

但是,如果不使用具有與分析色譜柱同等性能的制備色譜柱,則可能會造成分離效果不佳。Inertsil 即使是大口徑色譜柱,峰對稱性也很好,對稱因子(Asy)接近1,理論塔板數(N)在長度250mm 時維持著近20,000 段。因此,可順利實現從內徑4.6mm到50mm 的規模放大。

 

島津制備HPLC 色譜柱

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