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您何時需要使用菲羅門色譜柱呢?
發布時間:2020-02-13   點擊次數:574次
   菲羅門色譜柱的相關知識點你都了解清楚了嗎?
  您何時需要使用色譜柱呢?
  分析非常復雜,而且性質差異很大的混合化合物時;
  需要一個單一的方法來分離極性和非極性的可離子化或是中性化合物,而且使用可用在液質的流動相時;
  無法使用梯度分析時;?發現單一的疏水或是離子作用無法產生足夠的分離效果時;
  不想在太多不同的色譜柱中挑選以進行不斷的方法篩選時;
  發現單一疏水或是離子作用的色譜柱產生峰形差和柱效低時;
  進行離子化合物的制備時;
  在分析復雜的混合物時,想節約金錢和時間;
  菲羅門色譜柱異常沖洗步驟:
  1、低pH的高濃度中性鹽(如0.5M硫酸鈉溶液,硫酸調pH 3.0)沖洗15倍柱體積,有助于移除堿性蛋白;
  2、含有機溶劑(如10%-20%的甲醇、乙腈)的緩沖鹽溶液(如50mM磷酸鹽緩沖液,pH 7.0)沖洗15倍柱體積,有助于沖洗掉疏水蛋白;
  3、加入助溶劑有助于除去固定相上強吸附的物質(如通過氫鍵作用吸附等);
  4、按照色譜柱測試報告的進樣條件進對照品測試柱效;
  菲羅門色譜柱技術的差距在哪里?
  色譜柱技術包括填料技術和裝柱技術,填料技術自不待言,填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩定、均一的柱床,更多是一門藝術,需要經驗積累。
  國內和國外想比,我認為色譜柱的差距在于:國內公司以前都不會自己開發填料,一般買國外現成填料裝柱,買到的填料質量控制權不在自己手里。另外因為裝柱歷史短,經驗積累少,裝柱工藝也沒有完全達到國外水平。另外,對色譜柱性能很關鍵的基礎材料-----裸硅膠,國產的還不過關,在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產品相比,差距很大。
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