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Waters ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱
發布時間:2017-11-27   點擊次數:2476次

操作條件要求:
由于ACQUITY UPLC BEH HILIC色譜柱不含有任何鍵合相,因此其pH使用范圍為1-8,可以在90℃穩定范圍內使用
同其它任何色譜柱一樣,在pH、壓力以及高溫條件下使用將縮短色譜柱壽命
色譜柱平衡:
用50倍柱體積的50/50乙腈/水平衡,如果流動相中含有緩沖鹽則要求流動相中緩沖鹽的zui終濃度是10 mmol/L(以水相部分的濃度計算);
在開始進樣前,用20倍柱體積的起始流動相平衡后再進樣
如果使用梯度條件,在進樣前用8-10倍柱體積的流動相平衡
沒有充分平衡的色譜柱將可能會出現保留時間的波動
總是保持流動相中緩沖液的濃度為10mM(包括梯度條件下的應用)將得到更好的峰形
流動相要求:
總是經常保持至少5%的極性溶劑在流動相體系中或梯度流動相中(如5%水,5%甲醇或2%水+3%甲醇等),這將保證HILIC色譜填料始終處于水化潤濕狀態
在流動相體系中至少需要保證含有40%的有機溶劑(如乙腈)
盡量避免使用磷酸鹽體系的流動相(磷酸鹽緩沖液可能會在HILIC流動相體系中析出)
同甲酸或乙酸流動相相比,甲酸銨或乙酸銨緩沖溶液作流動相可以得到重現性更好的結果。如果方法中一定要用甲酸或乙酸,應該用0.2%(v/v)而不是0.1%(v/v)
進樣溶液的要求:
如果可能,進樣溶劑應該是100%有機溶劑,要盡可能去除樣品溶液中的水或將其含量zui低化。選擇洗脫強度弱的HILIC溶劑如乙腈、異丙醇、甲醇等
通用的進樣溶液是75/25乙腈/甲醇,使用此條件可以獲得較好的樣品溶解度和色譜峰形
避免使用水或DMSO作進樣溶劑(色譜峰形很差)
如果樣品內含有水或DMSO,需要使用反相SPE技術將溶劑體系轉換為乙腈。如果確實不能進行此操作,需要用有機溶劑稀釋水或DMSO。
其它需要注意的問題:
ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱僅僅是用來分析和保留強極性堿的,酸性、中性或非極性化合物沒有保留
對于分子量低于200道爾頓的強極性堿,ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱的*流速范圍是0.4~0.8ml/min
同Atlantis HILIC 硅膠基質的色譜柱相比,ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色譜柱的保留要弱(梯度條件下保留約低20%,等度條件下保留約低35~65%),這是由于BEH顆粒的表面硅羥基濃度較低的原因
在HILIC的使用中,請注意水是洗脫能力zui強的溶劑,因此樣品溶液中必須盡可能避免含水
摸索條件建議使用一個梯度條件(從95%乙腈至50%乙腈的梯度),如果沒有保留,則用95:3:2的乙腈:甲醇:水相緩沖液進行等度分析
將流動相中的水換成甲醇、丙酮或異丙醇也能提高保留
請確保進樣針清洗的弱清洗溶劑是起始流動相(如高比例有機溶劑),否則峰形將變差

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